Avaliação da citotoxicidade da temozolomida associada a nanopartículas de ouro em linhagem celular de câncer de pele do tipo melanoma

Abstract

ResumoO câncer de pele do melanoma, em sua forma maligna, representa a forma mais agressiva e letal de câncer de pele. A quimioterapia é utilizada no tratamento de pacientes com melanoma estágio IV, no entanto, mesmo reduzindo o tamanho dos tumores, o seu efeito muitas vezes é apenas temporário e podem ocorrer efeitos colaterais severos. A Temozolomida (TMZ) tem sido prescrita devido à facilidade de administração, tolerabilidade e capacidade conhecida de atravessar a barreira hematoencefálica. Por outro lado, a mesma já mostrou hemotoxicidade limitadora de dose e uma rápida hidrólise, o que acaba por limitar sua eficácia antitumoral. Em outra mão, estudos recentes têm mostrado que nanopartículas de ouro (NPAu), com sua biocompatibilidade e potencial citotóxico em células tumorais, podem vir a ser combinadas com drogas quimioterápicas através de adsorção eletrostática ou ligações covalentes, podendo levar a um aprimoramento cooperativo no tratamento já existente. Com isso o objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos do TMZ associado a NPAu (TNPAu) em linhagem celular de câncer de pele do tipo melanoma B16F10, bem como em células saudáveis NIH3T3. Para isso, NPAu foram sintetizadas nos tamanhos de 10, 20 e 30 nm, pelo método de redução de citrato e associadas a TMZ por agitação. Em seguida foram caracterizadas por espectrofotometria ultravioleta-visível, microscopia eletrônica de transmissão, índice de polidispersão, potencial zeta e espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier. A seguir os efeitos citotóxicos do TMZ, NPAu e TNPAu foram avaliados através do teste de MTT, utilizando diferentes concentrações nos períodos de 24, 48 e 72 horas. A concentração inibitória e o índice de combinação (sinergia) foram calculadas logo após. Avaliou-se também a hemotoxicidade da TMZ e TNPAu através do teste de hemólise, bem como o mecanismo de morte celular por citometria de fluxo. Os resultados mostraram que houve uma interação eletrostática entre TMZ e NPAu, não alterando o tamanho e a forma das NPAu. Além disso, a TNPAu foi mais citotóxica em células B16F10, mas não em células NIH3T3, do que a TMZ sozinha. O tratamento conjunto teve um efeito sinérgico e também hemocompatível. Finalmente, a TNPAu levou as células B16F10 à apoptose tardia quando comparadas ao controle. Tomados em conjunto nossos resultados mostraram que o uso da TNPAu levou a resultados melhores em relação a citotoxicidade e hemocompatibilidade em células B16F10 com concentrações mais baixas de TMZ, bem como se mostrou eficiente na indução de morte celular por apoptose quando comparado ao controle.