Predição e caracterização de um epítopo conformacional da crotoxina, uma neurotoxina presente no veneno da serpente Crotalus durissus terrificus

Abstract

A serpente Crotalus durissus terrificus pertencente à família Viperidae é a espécie mais amplamente distribuída pela América do Sul e responsável pelo maior coeficiente de letalidade. Dentre as toxinas que compõe o veneno, a que apresenta maior atividade tóxica e que representa 65% da sua composição é a crotoxina. Na ocorrência de acidentes o tratamento preconizado pelo Ministério da Saúde é a Imunoterapia que utiliza soros produzidos em cavalos para neutralizar a ação do veneno. Porém, a dificuldade em se obter um soro puro e em grande escala, torna necessária a busca por alternativas através de moléculas que apresentam o mesmo efeito da crotoxina. Os epítopos, também conhecidos como determinantes antigênicos, podem ser definidos como um grupo de aminoácidos derivados de antígenos proteicos, que podem interagir com receptores de células B ou com os receptores de célula T, resultando em uma resposta imune. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma molécula que tenha capacidade de ligar-se ao soro comercial anticrotálico. Foi realizada a caracterização e síntese de epítopos conformacionais da crotoxina, através de ferramentas de bioinformática e síntese in vitro de peptídeos utilizando a técnica de Fmoc. Esse epítopo na forma de peptídeo foi utilizado como antígeno para realização do teste de ELISA. Nossos resultados em relação à predição molecular realizada através de programas de bioinformática demonstraram que o peptídeo da crotoxina encontra-se exposto na superfície da molécula sendo acessível à ligação de anticorpos. Em relação aos resultados obtidos pelo teste de ELISA, observamos que o peptídeo sintetizado foi capaz de reconhecer o soro anticrotálico. Em virtude disto, o modelo tridimensional da crotoxina, mostrou-se confiável, resultando em um epítopo neutralizante, sendo então considerado uma molécula capaz de ser utilizada no sorodiagnóstico de acidentes com a serpente Crotalus durissus terrificus.